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循環腫瘤細胞臨床應用的研究進展

來源: | 作者:admin | 發布時間: 2020-07-17 | 3342 次瀏覽 | 分享到:

CTC，能更高效地捕獲CTC，捕獲效率約為90%，更適合大規模生產。但是，這類芯片所捕獲的CTC被固定在抗體包被的裝置表面，難以進一步分離。雖然胰蛋白酶能將CTC從裝置表面消化并釋放，但是經胰蛋白酶消化釋放的CTC可能失去很多有意義的表面受體。第三代芯片以CTC-iChip為代表，包括Ephesia公司的Ephesia，Cynvenio公司的Liquid Biopsy和Fluxion公司的Isoflux微流免疫磁珠富集，這類芯片將免疫磁珠和微流控富集技術相結合，捕獲效率與第二代芯片相當。以上芯片均基于CTC化學特性或表面生物標志物進行分離，目前也有基于CTC物理特性進行分選的分離技術，包括基于細胞大小和變形性差異的芯片技術，基于細胞力學性質的芯片技術和基于細胞介電性質的雙向電泳技術等。

CTC檢測主要包括從蛋白、染色體、DNA和RNA水平實現對腫瘤細胞的定性工作。在蛋白水平，利用免疫熒光標記，如選用CD45-/CK+/DAPI+作為腫瘤細胞定性的標志物，EPISPOT方法可以區分凋亡和有活性的CTC。細胞骨架蛋白對上皮細胞具有特異性，因此細胞角蛋白家族成員（CK8、CK18和CK19）也成為檢測上皮表型CTC的標志物。鑒于上皮標志物的局限性，針對干細胞標志物（CD133），間充質標志物（波形蛋白）和腫瘤組織特異性抗原，例如前列腺特異性抗原（PSA）、乳腺特異性抗原乳珠蛋白等也被用于CTC檢測。在染色體水平，熒光原位雜交技術能檢測特定染色體的擴增情況和靶基因的擴增情況；在DNA水平，基因測序和ARMS可以檢測到豐度低至0.1%~1.0%的突變基因；在RNA水平，基因表達圖譜和qPCR技術可檢測CTC基因表達水平。

03 CTC對腫瘤早期診斷的作用

傳統的影像學檢查難以發現腫瘤早期病灶。當病灶＜1 cm時，CTC檢測有可能早于影像學或臨床表現發現腫瘤，從而實現早期診斷。法國巴斯德醫院一項研究納入了168例慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）患者、42例吸煙者和35名健康人，研究發現168例COPD患者中CTC陽性的5例患者在隨訪的5年內均被診斷為肺癌。基于此項研究結果，LEROY等在法國21個研究中心開展了一項前瞻性、非隨機、多中心、雙盲AIR研究（NCT02500693），以期在肺癌高危人群（吸煙者、COPD患者等）中探討CTC對肺癌發生的預測作用。近年研究還發現具有特定核型或分子標記的CTC在腫瘤早期診斷中發揮了重要作用。一項納入136例新診斷的非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者、142例肺部良性疾病患者和32名健康受試者的臨床研究，通過陰性富集技術和FISH技術檢測8號染色體擴增型CTC，發現CTC數量能較好地區分NSCLC及肺部良性疾病患者。CTC中8號染色體的計數和非整倍性還在鼻咽癌早期診斷中有一定臨床意義。近期的一項研究在低劑量CT提示肺部結節的患者中，以組織活檢結果作為對照，通過檢測10q22.3/CEP10和3p22.1/3q29 FISH探針標記的CTC，與組織活檢相比，10q22.3/CEP10和3p22.1/3q29標記的CTC診斷肺癌的準確性為94.2%，敏感性為89.0%，特異性為100.0%。在乙肝相關肝細胞癌中，干細胞樣CTC對早期肝細胞癌診斷具有較高的敏感性（82.1%）和特異性（94.2%），并且能區分肝癌、乙肝和肝硬化。此外，CTC與其他腫瘤標志物聯合也有助于提高腫瘤早期診斷的準確性。一項納入155例前列腺癌患者的研究發現，PSA、CTC和12基因檢測平臺結合后，診斷的準確性達92.7%，CTC還與更高的Gleason評分和高風險相關。CTC與包含CCNE2、DKFZp762E1312、EMP2、MAL2、PPIC和SLC6A8的6基因檢測平臺相結合也有助于女性生殖系統腫瘤的早期診斷，聯合診斷宮頸癌的準確率達44%，對子宮內膜癌診斷準確率達64%，對卵巢癌診斷準確率為19%。